中文名称：考马斯亮蓝G250。二甲花青亮蓝

英文名称：Coomassie Brilliant blue G-250 (C.I. 42655)，rilliant blue G 

分子量：854.04 g/mol 

分子式：C₄₇H₄₈N₃NaO₇S₂ 

CAS NO.：6104-58-1 

λ_max. (buffer pH 7.0)：577 – 584 nm 

E 1 %/1 cm, λ_max. (pH 7.0)：450 – 570 

用途：亮蓝G250，是一种甲基取代的三苯基甲烷，染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍，马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，较大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有较大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比。 考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。G250常用的蛋白染料，作定性试验用,染色后为蓝绿色

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量

　　该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。常用于细胞骨架的检验。

1．Bradford浓染液的配制：

　　将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇，加入100ml浓磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。

2．标准曲线蛋白质样本的准备：

　　尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。

3．溶解：

　　将待测样本溶于100~1缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。

4．稀释：

　　按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。

5．作用：

　　每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．

6．计算：

　　根据标准曲线计算待测样本的浓度。

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