碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，AP）是一种普遍存在的二聚金属酶类，由Suzuki等在1907年首先发现的。生理作用是非特异性水解磷酸单酯键，分子量大小为120kDa，最适pH值为8.6-10.3，因此称为碱性磷酸酶。AP广泛运用于酶联（ELISA）、Western Bloting以及免疫组化技术等，作为多个试剂盒显色体系的关键成分，对试剂盒的质量有重要影响。碱性磷酸酶比活性高，稳定，所以经常被用于抗体或其他蛋白质的标记，而不会影响偶联蛋白的活性和功能。

戊二醛由于具有较低的价格和较高的活性，已成为最常用的用于AP偶联的交联试剂。这种使用戊二醛的AP偶联标记方法已经被广泛认可，但是也存在一定的缺陷，比如在标记时对戊二醛和抗体间的比率非常敏感，不合适的配比可能会导致较低的溶解性和酶活力；同时在标记过程中，也很难避免不同活力的混合物出现，因此在偶联时，待偶联反应发生后需要进行淬灭，纯化并去除多余的交联物；另外，对于待偶联物不同的制备来源和分子量大小，都会对最终的交联反应产生较大的影响。马来酰亚胺(maleimide)也被用于交联反应，其糖基部分可以与巯基反应以形成稳定的偶联物，但是需要提前对偶联抗体或蛋白进行二硫键还原处理。

SureLINK AP Conjugation Kits AP偶联标记试剂盒内提供了一个比上述方法更优秀更快捷的AP偶联方案。其原理是采用双偶联的技术分别对AP和抗体进行交联，如左上图所示。琥珀酰亚胺-4-苯甲酸甲酯Succinimidyl-4-Formyl Benzoate (SFB)的醛基与抗体蛋白结合，同时Succinimidyl 6-hydrazinonicotinate Acetone Hydrazone(SANH)的肼基偶联上AP，这样通过醛基与肼基之间形成稳定的腙键而实现抗体蛋白与AP的偶联。

作为即用型的组分，SureLINK™AP偶联蛋白/抗体试剂盒能在90分钟制备完成标记HRP的抗体或蛋白。制备好的AP标记的抗体或蛋白能在4℃稳定保存至少半年。试剂盒内包括SureLINK Modified AP（干粉）、AP激活及偶联缓冲液、SFB以及AP储存缓冲液。每毫克经SFB修饰的AP可结合0.1-0.5mg抗体或蛋白，特别适合于AP单克隆抗体的制备。经SureLINK AP Conjugation Kits 偶联试剂盒标记的抗体，结合相应的显色或化学发光底物，可应用于ELISA、WB及免疫组化等方法的免疫学检测及定量分析。

SureLINK™ AP标记抗体/蛋白试剂盒具有以下优点：

• 方便快速：两步反应（见右），近三个小时（20分钟手动工作）就可以完成整个交联反应；
• 活性强：可以标记从0.05mg到1.5mg范围的抗体（蛋白）；
• 通用性：可以用于下游各种免疫检测实验，比如ELISA, Western blotting和免疫组化

除了完整的AP标记抗体/蛋白试剂盒，还有单独组分的SureLINK Modified AP（干粉状的激活AP）提供。

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司，同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。 KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对于蛋白标记以及蛋白偶联，KPL有HRP及AP标记及偶联试剂盒，还有专门用于两个蛋白质之间的偶联试剂盒提供。另外还有多种化学发光和显色底物及相关产品，以及全系列针对不同种属的各种标记的现货二抗。如果您对KPL的产品感兴趣，请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料，或者问询您所感兴趣的产品类型。