逆转录病毒载体是常用的病毒载体之一。反转录病毒载体可以容纳外源DNA的长度在10kb左右,以很高的转染率感染宿主细胞,特别是分裂中的细胞,如干细胞等。反转录病载体多半用于基因治疗,由于病毒载体在宿主细胞基因组上随机插入,人们担心会引起不安全的后果,这种载体还在不断改进之中。
常规的逆转录病毒纯化一般采用超速密度离心法(利用不同大分子,如DNA、蛋白、病毒颗粒、细胞碎片等具有不同的密度进行梯度离心而分离出来的原理)分离病毒颗粒,但是耗时耗力。而且,逆转录病毒的低滴度一直是其软肋。Cell Biolabs为此研制出的拥有专利技术的ViraBind™ 逆转录病毒纯化试剂,再结合新型的纯化装置,能在4-6小时内,每次能将100ml病毒上清纯化500-1000倍,从而获得109-1010TU/ml感染滴度的逆转录病毒颗粒。采用该Kit纯化获得的逆转录病毒液,不含有游离的包装蛋白以及转导抑制物,因此非常有利于后继的逆转录病毒操作。
Cell Biolabs提供两种逆转录病毒纯化方案,一种是用纯化柱装置,另一种是PLUS的采用透析柱装置。前者纯化过程快速,只需3小时;后者采用了透析柱装置,时间上要过夜透析,但是纯度很高。具体纯化步骤及大概区别如下图所示:
逆转录病毒纯化&浓缩试剂盒(离心柱) | 逆转录病毒纯化&浓缩试剂盒PLUS(透析柱) |
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采用专利的ViraBind™试剂,使用离心柱,只需3小时 | 采用专利的ViraBind™试剂,使用透析柱,需要过夜,但纯度高 |
Cell Biolabs逆转录病毒浓缩纯化试剂盒中普通纯化逆转录病毒Kit每次纯化100ml,分2次/5次/25次三种规格;PLUS纯化Kit分中提(50ml每次)和大提(500ml每次),中提包装可使用2次,大提又分为2次和10次。每次能将100ml病毒上清纯化500-1000倍,从而获得109-1010TU/ml感染滴度的逆转录病毒颗粒。采用该Kit纯化获得的逆转录病毒液,不含有游离的包装蛋白以及转导抑制物,因此非常有利于后继的逆转录病毒操作。
美国著名细胞产品公司Cell BioLabs为逆转录病毒研究人员提供完备的重组逆转录病毒表达系统及其相关产品和服务,产品包括逆转录病毒的最新一代表达系统,针对逆转录病毒滴度低的软肋而专门设计的逆转录病毒浓缩纯化试剂盒,逆转录病毒的快速定量,以及逆转录病毒高效转染试剂和用于包装重组逆转录病毒的包装细胞系等,几乎覆盖反转录病毒研究中的所有技术环节。如果您对上述逆转录病毒包装细胞系感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。