自由基对蛋白质的作用包括蛋白质肽链断裂、蛋白质分子相互间交联聚合、蛋白质氨基酸发生氧化脱氨反应、氧自由基攻击蛋白质还原性基团、脂类氧化裂解所产生的丙二醛与蛋白质上的氨基产生分子间的交联等。目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个,分别是蛋白羰基生成(羰基化)和二酪氨酸的生成(蛋白质中酪氨酸硝基化)。Cell BioLabs为您提供完整的蛋白质氧化损伤检测方案,其OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits(蛋白质羰基化分析试剂盒)专门用于快速检测蛋白质发生氧化应激后,其羰基化程度;OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits(蛋白质硝基化分析试剂盒)为检测细胞内蛋白质是否发生硝基化反应提供了便捷的解决方案;而OxiSelect™ AOPP Assay Kits(终末氧化蛋白产物分析试剂盒)则能快速的检测蛋白氧化后的损伤后果。
蛋白质羰基化是指氨基酸残基侧链中的氨基或亚氨基受到氧自由基攻击最后转变成醛基,并释放NH3的过程。其在体内的形成主要是通过金属离子催化氧化系统完成。在这个过程中,二价铁离子与蛋白质上的氨基酸残基形成铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物。H202作用于此配位复合物的铁(Ⅱ)上,产生·OH、OH-和铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物。·OH从侧链氨基酸上提出一个氢原子,使侧链氨基酸上的碳上有一个不配对电子。在此不配对电子作用下,铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物又重新变回铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物,随后配位键断开,二价铁离子和NH3与复合物分离,由此在蛋白质侧链形成羰基或羰基衍生物。蛋白质中的赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸残基都有可能参与糖基化。
蛋白质氧化损伤羰基化的检测目前主要使用2,4-二硝基苯肼法。传统方法多是采用比色法,虽然操作简单但是误差很大,但不能满足精密的蛋白质糖化测定要求。Buss及其同事采用免疫反应的原理使用DNP抗体检测蛋白质羰基化程度,但是在具体的操作中,用TCA沉淀蛋白的时候会有至少20%的总蛋白损失,导致了其结果的不准确。Cell BioLabs的OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits(蛋白质羰基化分析试剂盒)则提供了更优的选择,使用该羰基化检测试剂盒,无需蛋白浓缩沉淀从而降低了中间的损失,而且检测灵敏度也由原来的>4 mg/mL大幅提高到10 μg/mL。
OxiSelect™ 蛋白质羰基化分析试剂盒为您提供多种检测方案,您可以根据您的实验要求,选择ELISA(目录号:STA-310/STA-310-5)、免疫印迹(目录号:STA-308)或者分光光度计(目录号:STA-315)检测方面中的任何一种。
上海金畔生物科技有限公司与美国知名细胞试剂服务商Cell BioLabs共同为您定制最优的细胞生物学解决方案,除了蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案;还为您提供脂质过氧化过程中壬烯(HNE)和丙二醛(MDA)检测试剂盒;另外对于核酸DNA、RNA的损伤检测,除了传统的8-OHdG/8-OHG定量、AP位点分析等,还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析;针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测,也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。